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PCR仪温度校准说明

浏览次数:61发布日期:2020-09-22
   PCR仪温度校准说明
  PCR仪温度校准是一种用来放大特定的DNA时间段的仪器,主要采用的是半导体热泵制冷技术以及膜加热技术,保证了升温速度的稳定和快速。
  PCR技术能快速地在体外试管内扩增目标基因或DNA时间段,是科研人员获得目标DN时间片段的常用技术,在生物医学领域得到广泛的应用。PCR仪样品块的温度精度和均匀性是影响PCR反应效果的重要因素。为了测量样品块的温度均匀性及其它温度参数,要求测量工具必须具有多个测量通道,且具有很佳的测量精度、响应速度、通道一致性和通道同步性。
  关于PCR仪温度校准的详细说明:
  (一)温度准确性
  温度准确性是PCR仪重要的性能指标,如温度准确性低可直接造成非特异性扩增,甚错误的扩增结果,造成假阳性和假阴性。
  市场上各家厂商考核基因扩增仪(PCR仪)性能的主要指标,一般厂家的企业指标为±0.5℃,一些性能较好的产品可以实现的温度准确度为±0.3℃。故需对PCR仪控温准确度进行测试。
  校准实验平均温度的计算公式为:I—参加检测的温度探头序号;n—参加检测的温度探头的数量
  (二)温场均匀性
  由于PCR仪加热器加热不均匀,导致PCR仪模块上各孔存在一定温差。造成试验结果偏差。一般PCR仪边缘点的温度低于中间区域,所以均匀性为PCR仪重要的性能指标。一般厂家的企业指标规定均匀性为±0.5℃,一些性能较好的产品可以实现的温度均匀度为±0.3℃。
  校准实验时,通过选取孔板中16个特殊反应位置来测量温度,并得出孔板的温度均匀性。均匀性为各个探头在同一时刻大温度与小温度的差值。均匀度计算公式为:tmax-tmin(tmax =大温度;tmin =小温度)
  (三)升降温速率
  PCR扩增产物数量的多少决定了PCR的效率。为了在短时间内获得尽可能多的产物,需要仪器在升降温段具有按照预设升降温速率快速升温和降温的能力(大升温速率达15~20℃)。一个完整的PCR过程,是由若干个升温→恒温→降温循环构成的。因为“变性”,“退火”和“延伸”3个阶段是必须要保证的。因此,只有使升降温的过程尽可能地迅速,才能缩短每个PCR循环以及整个PCR 过程所需时间。一般厂家的企业指标规定升温速率为±3℃/sec。
  PCR仪温度校准实验中,升温速率为温度从40℃到90℃的时间;降温速率为温度从70℃到35℃的时间。
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